DBS 干血斑應用特集 4: 牛孢疹病毒抗體的檢測
牛鼻氣管炎及其診斷
牛鼻氣管炎 (bovine rhinotracheitis, IBR) 是一種牛的流行性疾病，患病會引起牛的產量下降、高額的治療費用和貿易限制，因此會在世界范圍內造成巨大的經濟損失。
牛孢疹病毒 BoHV-1 是傳染性牛鼻氣管炎 (IBR) 的病原體，而 BoHV-1 抗體則是診斷牛鼻氣管炎的生物標記物。對牛進行定期的 BoHV-1 抗體監(jiān)測可以在病?；疾〕跗谶M行個體識別與隔離，有效地降低牛鼻氣管炎在牛群中大規(guī)模傳播的風險，因此對保障畜牧業(yè)收益具有重要的價值。
干血斑: 方便的血樣采集
目前 BoHV-1 抗體監(jiān)測采用的是酶聯免疫吸附測定 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，需要由獸醫(yī)抽取牛的靜脈血液，離心分離出血漿，再進行檢測。靜脈取血的取血量大，且過程比較復雜，需要獸醫(yī)具有豐富的經驗。取血過程中，動物往往會出現抵觸情緒，有時甚至會受到驚嚇。
干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲存方法。它將微升級末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點。該方法采樣過程簡單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對小型動物 / 寵物和實驗動物進行血樣采集。
相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實現樣品的常溫運輸，更可以以更溫和的條件儲存樣品，構建生物樣本庫。
簡單血樣采集步驟
DBS 干血斑應用案例:
牛孢疹病毒抗體的檢測
研究首次將 DBS 技術應用于 BoHV-1 抗體的檢測中，從技術上證明了其應用可行性。BoHV-1 陽性和陰性的干血斑樣本通過全自動干血斑萃取平臺 DBS-MS 500 Hct 直接萃取收集，再進行 ELISA 測試，檢測 BoHV-1 抗體。
與干血斑樣品對應的血漿樣本 (BoHV-1 陽性和陰性) 也采用相同的檢測方式進行檢測，用于對比干血斑樣本與傳統血漿樣本的異同。另外，此項研究還探討了干血斑的儲存條件與時間對 BoHV-1 抗體檢測結果的影響。
樣本
9 個陽性干血斑樣本、20 個陰性干血斑樣本及對等數量的陽性和陰性血漿樣本
檢測目標
BoHV-1 抗體
卡片
Ahlstrom AutoCollectTM?
樣本運輸條件
室溫三天、-20°C 四個月、保存四周 (含 4 個不同條件: 4°C、室溫、37°C 及一小時紫外光照后室溫)
提取方法
Epitope ELISA kit 緩沖液直接提取
檢測方法
ELISA、IDEXX IBR gB X3 Ab Test kit
結果
干血斑樣本的檢測結果與傳統血漿樣本結果完全一致。
另外，干血斑樣本在室溫下保存 3 天或在 -20°C 保存 4 個月，都能得到準確的檢測結果，因此其高穩(wěn)定性可以允許干血斑樣本的室溫運輸及長期保存，特別適合用于相關疾病的大規(guī)模篩查。
從左至右的五個條件分別為室溫保存 3 天的陽性干血斑、-20°C 保存 4 個月的陽性干血斑樣本、陽性血漿樣本、陰性干血斑樣本和陰性血漿樣本?？贵w效價說明: >55% 認定為陽性，<45% 認定為陰性，45% – 55% 之間為懷疑樣本。
參考文獻:
Lechmann, J.; Gehrig, O.; Luginbühl, M.; Fraefel, C.; Gaugler, S.?Fully automated dried blood spot sample handling and extraction for BoHV-1 antibody testing by ELISA. J. Virol. Methods 2022, 310, 114626.
配合干血斑加快進行生物標記物的研究，力揚推出 CAMAG 全自動干血斑萃取系統 DBS-MS 500，從自動化方向對傳統干血斑技術進行的一次全面升級，可實現全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結合質譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術，應用于以下領域：
健康生物標記物檢測
治療藥物監(jiān)測
基因組檢測
感染檢測
生物樣本庫
藥物的臨床前試驗
食品安全
